原代細胞培養(yǎng)過程是怎么樣的

　　原代細胞是指從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞。一般情況下，常把培養(yǎng)的第1代細胞與傳10代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。原代細胞培養(yǎng)需經(jīng)過準備、處理、剪切、消化分離、計數(shù)、培養(yǎng)這幾個階段。具體說明如下：

　　1、準備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，進行操作前的洗手、消毒。

　　2、處理：點燃酒精燈，把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污。

　　3、剪切：用手術刀將組織切成若干小塊，加入比組織塊總量多30-50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角燒瓶中，結扎瓶口或塞以膠塞。

　　4、消化分離：將三角燒瓶置于用恒溫水浴，每隔20分鐘搖動一次，在消化過程中發(fā)現(xiàn)消化液混濁時，可在鏡下觀察，如果組織已分散成細胞團或單個細胞，立即終止消化，進行低速分離后加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

　　5、計數(shù)：用計數(shù)板計數(shù)，對大多數(shù)細胞來說，pH需要控制在7.2-7.4范圍內(nèi)。

　　6、培養(yǎng)：置于37℃的CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布棉塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。

　　注意，原代細胞的培養(yǎng)得保證無菌環(huán)境，并且細胞生長所需要的營養(yǎng)成分得充足。